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拓撲異構酶 拓撲異構酶有哪些類型

  說起拓撲異構酶,這是一種比較陌生的物質,其實這種物質對于我們的身體有著非常重要的作用。那么你知道拓撲異構酶有哪些類型呢,拓撲異構酶的化學反應是什么呢,它的作用又是什么呢?下面我們就一起來了解一下。

  DNA拓撲異構酶是存在于細胞核內的一類酶,他們能夠催化DNA鏈的斷裂和結合,從而控制DNA的拓撲狀態,拓撲異構酶參與了超螺旋結構模板的調節。主要存在兩種哺乳動物拓撲異構酶。DNA拓撲異構酶I通過形成短暫的單鏈裂解-結合循環,催化DNA復制的拓撲異構狀態的變化;相反,拓撲異構酶II通過引起瞬間雙鏈酶橋的斷裂,然后打通和再封閉,以改變DNA的拓撲狀態。

  哺乳動物拓撲異構酶II又可以分為αII型和βII型。拓撲異構酶毒素類藥物的抗腫瘤活性與其對酶-DNA可分裂復合物的穩定性相關。這類藥物通過穩定酶-DNA可分裂復合物,有效地將酶轉換成纖維毒素。

  分類

  可分為兩類,一類叫拓撲異構酶I,一類叫拓撲異構酶II。拓撲異構酶I催化DNA鏈的斷裂和重新連接,每次只作用于一條鏈,即催化瞬時的單鏈的斷裂和連接,它們不需要能量輔因子如ATP或NAD。E.coliDNA拓撲異構酶I又稱ω蛋白,大白鼠肝DNA拓撲異構酶I又稱切刻-封閉酶(nicking-closing enzyme)。拓撲異構酶II能同時斷裂并連接雙股DNA鏈.它們通常需要能量輔因子ATP。

  在拓撲異構酶II中又可以分為兩個亞類,一個亞類是DNA旋轉酶(DNA gyrase),其主要功能為引入負超螺旋,在DNA復制中起十分重要的作用。迄今為止,只有在原核生物中才發現DNA旋轉酶.另一個亞類是轉變超螺旋DNA(包括正超螺旋和負超螺旋)成為沒有超螺旋的松弛形式(relaxed form)。這一反應雖然是熱力學上有利的方向,但不知道為什么它們仍然像DNA旋轉酶一樣需要ATP,這可能與恢復酶的構象有關。這一類酶在原核生物和真核生物中都有發現。

  第一類

  DNA拓撲異構酶能催化的反應很多,DNA拓撲異構酶I對單鏈DNA的親和力要比雙鏈高得多,這正是它識別負超螺旋DNA的分子基礎,因為負超螺旋DNA常常會有一定程度的單鏈區。負超螺旋越高,DNA拓撲異構酶I作用越快。現已知道,生物體內負超螺旋穩定在5%左右,低了不行,高了也不行。

  生物體通過拓撲異構酶1和II的相反作用而使負超螺旋達到一個穩定狀態。現已發現,編碼E.coli拓撲異構酶I的基因topA發生突變,則會引起旋轉酶基因的代償性突變;否則,負超螺旋增高,細胞生活能力降低。拓撲異構酶I作用的堿基序列特異性不高,但切點一定在C的下游方向4個堿基(包括C本身)的位置。在將DNA單鏈切斷后,拓撲異構酶I連接于切口的5端,并貯藏了水解磷酸二脂鍵的能量用以連接切口,因而拓撲異構酶I的作用不需能量供應。

  此外.拓撲異構酶I還能促進兩個單鏈環的復性,其作用是解除復性過程所產生的鏈環數的負值壓力,以使復性過程進行到底。如果在一個單鏈環上一個部位切斷,而使另一部位繞過切口.則可產生三葉結結構分子。如果有兩個雙鏈環,其中一個有一個切刻,拓撲異構酶1則可以將切刻對面的一條鏈切斷,伎完整的雙鏈環套進去,再連接起來而成為環連體分子。

  第二類

  大腸桿菌的拓撲異構酶II(gyrase)除了引入負超螺旋以外.還具有形成或拆開雙鏈DNA環連體和成結分子的能力。II類拓撲異構酶沒有堿基序列特異性,它們可以和任何相交的兩對雙鏈DNA結合。DNA旋轉酶有兩個α亞基和兩個β亞基。α亞基約105KDa,為gyrA基因所編碼,具有磷酸二脂酶活性,可為萘啶酮酸(nalidixic acid)所抑制。A亞基約95KD,為graB基因所編碼,具有ATP酶活性,可為新生霉素所抑制。

  這兩種藥物均可抑制野生型大腸桿菌的DNA復制。可見DNA旋轉酶為E.coli的復制所不可缺少的。在切斷一條DNA雙鏈后,兩個a亞基各結合于切口的一個5'端,并貯藏了水解磷酸二酯鍵而獲得的能量,由于該酶的整體性,因而DNA鏈的四個斷頭并無任意旋轉的可能性。由于酶的別構效應,使完整的雙鏈穿過切口,然后再重新形成磷酸二酯鍵。

  β亞基的功能在于水解ATP以使酶分子恢復原來的構象,以便進行下一輪反應。這一點可以用ATP的同系物β,γ-亞氨基ATP代替ATP而得到證實。因為這一同系物不能被DNA旋轉酶所水解,但它確能促進第一輪拓撲異構反應,使負超螺旋增加,而妨礙以后進一步的拓撲異構反應。

  化學反應

  DNA拓撲異構酶催化反應

  其反應本質是先切斷DNA的磷酸二脂鍵,改變DNA的鏈環數之后再連接之,兼具DNA內切酶和DNA連接酶的功能.然而它們并不能連接事先已經存在的斷裂DNA,也就是說,其斷裂反應與連接反應是相互耦聯的。

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