免疫學(xué)檢測
機(jī)體感染梅毒螺旋體后，經(jīng)過一定潛伏期，血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類脂質(zhì)抗體(非特異性的血清反應(yīng)素)和抗梅毒螺旋體抗體(特異性的免疫球蛋白)，用血清學(xué)試驗(yàn)檢測患者血清中的反應(yīng)素或抗體是診斷梅毒的最主要的實(shí)驗(yàn)室檢查方法，根據(jù)檢測試劑中所用抗原不同可分為兩類，一類為非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)，另一類為梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)。
1.非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)這類試驗(yàn)的抗原為心磷脂、卵磷脂和膽固醇的混懸液，用來檢測血清中抗心磷脂抗體。此類試驗(yàn)為非特異性抗體檢測試驗(yàn)，為梅毒的常規(guī)篩查試驗(yàn)。美國CDC認(rèn)可的磷脂抗體檢測實(shí)驗(yàn)包括VDRL、USR、RPR、TRUST.
(1)研究實(shí)驗(yàn)室玻片試驗(yàn)<veneraldiseaseresearchlabo-ratorytest，vdrl)
vdrl試驗(yàn)所用抗原是從牛心中提取心磷脂，適量加入膽固酵及卵磷脂以提高敏感性，通常稱這種抗原為心磷脂抗原。梅毒螺旋體在破壞組織的過程中，體內(nèi)釋放一種抗原性心磷脂，它刺激機(jī)體產(chǎn)生反應(yīng)素，這種反應(yīng)素與牛心中提取的心磷脂在體外發(fā)生抗原抗體反應(yīng)。< p="">
1)檢測方法
有定性試驗(yàn)與定量試驗(yàn)。
2)診斷意義及評價(jià)
①可作定量及定性試驗(yàn)，操作簡單.報(bào)告快速，費(fèi)用低，并有一定的敏感性和特異性，可用于標(biāo)本的初篩及作為療效觀察、隨訪的指標(biāo);②是唯一推薦用于檢測腦脊液反應(yīng)素的試驗(yàn)，對診斷神經(jīng)梅毒具有重要價(jià)值;③某些生物學(xué)因素及某些疾病(如結(jié)締組織病、感染性疾病等)存在時(shí)可能出現(xiàn)假陽性;④操作不正確或由于抗體過剩引起的前帶效應(yīng)，可導(dǎo)致假陰性反應(yīng);⑤本法對一期梅毒敏感性不高;⑥應(yīng)用顯微鏡讀取結(jié)果。
(2)不需加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(unheatedserumregaintest，USR)
該試驗(yàn)用改良的VDRL抗原，稀釋后離心沉淀，于沉淀中加入二胺四乙酸二鈉(EDTA)、防腐劑，并加入氯化膽堿起化學(xué)“滅活”作用。待檢血清不必滅活。
1)檢測方法
有定性試驗(yàn)和定量試驗(yàn)。
2)診斷意義及評價(jià)
①可作為療效觀察、隨訪、有否復(fù)發(fā)或再感染指征。
②USR試驗(yàn)所用抗原是VDRL抗原的改良，敏感性及特異性與VDRL相似。
③在玻片上做絮狀反應(yīng)，可肉眼讀取結(jié)果。
④血清不需加熱滅活，抗原懸液可保存4個(gè)月，不需即時(shí)配制，節(jié)省操作時(shí)間。
(3)快速血漿反應(yīng)環(huán)狀卡片試驗(yàn)(rapidplasmareagincardtest，RPR)
RPR是80年代問世的非特異性梅毒血清學(xué)試驗(yàn)，所用抗原為標(biāo)準(zhǔn)的牛心肌脂抗原，該法操作簡便、快速。原理與USR試驗(yàn)基本相同，由于在RPR抗原中加入了活性碳顆粒.試驗(yàn)在特制的白色紙卡上進(jìn)行，所以容易判斷結(jié)果。是目前實(shí)驗(yàn)室最常用的梅毒篩選實(shí)驗(yàn)。
1)檢測方法
有定性試驗(yàn)與定量試驗(yàn)。
2)診斷意義及評價(jià)
①該法操作簡便、迅速，適用于大量標(biāo)本檢測。
②靈敏度較VDRL高，特別是在早期梅毒。主要用于Ⅰ期梅毒的診斷。
③結(jié)果容易判定、不需滅活、不需顯微鏡，抗原不需新鮮配制等。
④定性試驗(yàn)陽性都必須做定量試驗(yàn)，陽性者需了解抗體效價(jià)的高低，以便監(jiān)視疾病活動情況和觀察療效。
⑤當(dāng)抗體含量過高時(shí)，可出現(xiàn)“前帶現(xiàn)象”導(dǎo)致陰性反應(yīng);定量試驗(yàn)還可排除“前帶現(xiàn)象”。
⑥某些生物學(xué)因素及某些疾病可導(dǎo)致生物學(xué)假陽性反應(yīng)。
(4)甲苯胺紅不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)(TRUST)
本試驗(yàn)所用的抗原是從牛心提取的心磷脂和從雞蛋黃提取的卵磷脂及膽固醇，與RPR方法比較，是在TRUST抗原中加人甲苯胺紅染料顆粒代替碳顆粒作為指示物，使陽性結(jié)果出現(xiàn)紅色絮狀凝集現(xiàn)象。其操作方法、結(jié)果判讀與檢測意義與RPR相同。其缺點(diǎn)是許多因素可影響測定結(jié)果，如高脂血癥和抗心磷脂抗體陽性患者的血清均可干擾而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。而且該試驗(yàn)在非淋菌性尿道炎患者中存在生物學(xué)假陽性。
(5)康_華氏試驗(yàn)
是最早采用的梅毒血清學(xué)試驗(yàn)。這兩種試驗(yàn)的抗原采自牛心肌乙醇浸液，稱作心肌脂抗原。此類試驗(yàn)操作復(fù)雜，易出現(xiàn)假陽性。現(xiàn)已被淘汰。
2.梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)此類試驗(yàn)采用的抗原是梅毒螺旋體，檢測血清中的抗梅毒螺旋體IgM或IgG抗體，其敏感性和特異性均較高。常用的方法有梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn)、梅毒螺旋體熒光抗體吸收試驗(yàn)、梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、梅毒螺旋體免疫印跡試驗(yàn)、梅毒螺旋體制動試驗(yàn)等。
(1)梅毒螺旋體微量血凝試驗(yàn)(mierohemagglutinationassayforantibodiestoTreponemapallidumMHA-TP)
是以梅毒螺旋體為抗原的間接血球凝集試驗(yàn)，用于檢測血清中特異性梅毒螺旋體抗體，是目前國內(nèi)常用的梅毒血清學(xué)確證試驗(yàn)。所用抗原為經(jīng)超聲渡處理的Nichol梅毒螺旋體提取物，再經(jīng)醛化和鞣酸處理的綿羊紅細(xì)胞致敏，稱為致敏血球。待檢血清用吸附劑處理，吸附劑是用非致病性螺旋體Reiter株經(jīng)培養(yǎng)繁殖一定量后，高壓滅菌，高速離心而得。待檢血清經(jīng)吸收處理后，可除去非特異性螺旋體抗體。
診斷意義及評價(jià)
①TPHA的敏感性和特異性均較高?是梅毒的權(quán)威性診斷方法。
②操作簡單，血清血漿均可檢測，結(jié)果清晰易判斷。
③該試驗(yàn)一旦陽性，約95%患者終身不轉(zhuǎn)陰，因此該試驗(yàn)陽性只能說明患過梅毒，不能作為療效觀察及隨訪指征。
④試劑成本較高，結(jié)果判斷難以自動化。
(2)梅毒螺旋體熒光抗體吸收試驗(yàn)(fluoresceneetrepo-nemaantibodyabsorptiontest，F(xiàn)TA-ABS)
該法以密螺旋體無毒株(Reiter株)抗原吸收待檢血清，排除同屬抗原的交叉結(jié)合，保證了試驗(yàn)結(jié)果的特異性;以整條梅毒螺旋體檢測血清中抗體，確保各種抗原分子的完整存在，提高了試驗(yàn)的敏感性。美國常采用此試驗(yàn)作為梅毒的確認(rèn)試驗(yàn)。
診斷意義及評價(jià)
①FTA-ABS具有特異性高、敏感性較強(qiáng)的特點(diǎn)，被認(rèn)為是檢測梅毒的“金標(biāo)準(zhǔn)”。
②該試驗(yàn)一旦陽性，約95%患者終身不轉(zhuǎn)陰，因此該指標(biāo)陽性只能說明患過梅毒，不能作為療效觀察及隨訪指標(biāo)。
③需有優(yōu)質(zhì)的熒光顯微鏡和技術(shù)熟練的操作人員，試驗(yàn)結(jié)果判定常帶有主觀色彩。不作為梅毒診斷的首選方法。
④血清標(biāo)本陳舊與污染、操作不準(zhǔn)確等可引起的假陽性。
⑤紅斑性狼瘡、麻風(fēng)、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、混合結(jié)締組織病、海洛因成癮等可引起假陽性反應(yīng)。
(3)梅毒螺旋體酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzymelinkedimmu-nosorbentassay，TPELISA)
是近年來隨著梅毒螺旋體基因工程抗原的研制成功而建立的方法。該法用雙抗原夾心法測定梅毒特異性抗體，主要檢測梅毒螺旋體IgG和IgM抗體，國內(nèi)外的研究也表明，TP-ELISA和TPHA、FTA-ABS等有良好的相關(guān)性。該法操作簡便，不受樣品中纖維蛋白(原)和溶血等影響，一次可進(jìn)行多份樣品的檢測，用酶標(biāo)儀分析，客觀準(zhǔn)確，結(jié)果便于保留及標(biāo)準(zhǔn)化管理，可用作篩查和確認(rèn)試驗(yàn)。因此，TP-ELISA方法被公認(rèn)為梅毒血清學(xué)診斷實(shí)驗(yàn)的首選方法。
1)檢測方法
利用間接法ELISA的原理，把抗人IgG或IgM單克隆抗體包埋在微量滴定板或其它固相載體上，加人待檢血清以捕捉其中的IgG或IgM，再先后加人超聲粉碎或基因重組獲得的梅毒螺旋體抗原、生物素標(biāo)記的抗梅毒螺旋體單克隆抗體、辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素及底物，最后通過顯色判定結(jié)果。
2)診斷意義及評價(jià)
①可以測IgG和IgM抗體，是對早期梅毒、胎傳梅毒診斷有重要意義。
②ELISA方法易自動化，適用于大量標(biāo)本的檢測。
(4)梅毒螺旋體免疫印跡試驗(yàn)(westernimmunoblottingtechnique)
是20世紀(jì)80年代發(fā)展起來的一種檢測技術(shù)。該試驗(yàn)通過轉(zhuǎn)移電泳制備的硝酸纖維膜條上含有梅毒螺旋體的蛋白以確認(rèn)是否梅毒感染。
診斷意義及評價(jià)
①免疫印跡法結(jié)合了免疫學(xué)和分子生物學(xué)的特點(diǎn)，敏感性高，特異性強(qiáng)。
②該法操作簡便，對試驗(yàn)儀器和環(huán)境的要求不高，結(jié)果容易判定，但成本較高。
③是早期梅毒、胎傳梅毒和療效觀察的十分敏感和特異的方法。
(5)梅毒螺旋體制動試驗(yàn)(treponemapallidumimmobi-lization，TPI)
用活的Nichol株螺旋體加患者血清(含抗體)后，在補(bǔ)體的參與下可抑制螺旋體的活動。如≥50%梅毒螺旋體停止活動，則為陽性。此試驗(yàn)特異性、敏感性均高，但設(shè)備要求高，操作難，僅供研究用。
3.梅毒血清學(xué)試驗(yàn)的應(yīng)用評價(jià)
(1)非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值
①適用于常規(guī)檢查及大量人群篩選。
②定量試驗(yàn)可監(jiān)測疾病活動情況和觀察治療效果，輔助判斷是否復(fù)發(fā)與再感染。
③鑒別早期梅毒與晚期潛伏梅毒，先天梅毒與被動反應(yīng)素血癥。
④腦脊液作VDRL試驗(yàn)，有助于神經(jīng)梅毒的診斷。
⑤非梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)陽性者，要用梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)確認(rèn)。
(2)梅毒螺旋體抗原試驗(yàn)應(yīng)用價(jià)值
①用活的或死的梅毒螺旋體或其成分作抗原測定抗螺旋體抗體。這種試驗(yàn)敏感性和特異性均高，一般用作證實(shí)試驗(yàn)。
②即使患者經(jīng)過足夠的抗梅毒治療，此類血清學(xué)反應(yīng)仍可保持陽性，甚至保持終生，因此，不能用于觀察療效。
(3)血清中抗梅毒螺旋體IgM型抗體檢測
血清中的抗梅毒螺旋體IgG抗體，即使是患者經(jīng)過足夠治療后，仍能長期存在，甚至終身不消失。血清反應(yīng)持續(xù)陽性，只能作為流行病學(xué)檢測。血清中的抗梅毒螺旋體IgM抗體是早期梅毒、活動性梅毒、再染性梅毒的標(biāo)志，可用來監(jiān)測病情，指導(dǎo)治療和判斷愈后，并可以診斷先天梅毒和活動性神經(jīng)梅毒。
(4)梅毒血清反應(yīng)的假陽性
①急性生物學(xué)假陽性
一般出現(xiàn)于非螺旋體抗原血清試驗(yàn)，見于麻疹，水痘、風(fēng)疹、傳染性單核細(xì)胞增多癥、上呼吸道感染、猩紅熱、亞急性細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、肺炎鏈球菌性肺炎、活動性肺結(jié)核、絲蟲病、斑疹傷寒、錐蟲病、回歸熱、鉤端螺旋體、瘧疾等，但滴度較低，一般在1：8以下。往往在6個(gè)月內(nèi)轉(zhuǎn)陰。
②慢性生物學(xué)假陽性
可持續(xù)6個(gè)月以上或數(shù)年，甚至終身。多數(shù)出現(xiàn)于非螺旋體抗原血清試驗(yàn)假陽性，常見于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、播散性盤狀紅斑狼瘡、自身免疫性溶血性貧血、進(jìn)行性系統(tǒng)性硬化癥、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等自身免疫性疾病，滴度可達(dá)1：64～1：128;少數(shù)孕婦、正常人群假陽性率為1%～2%。在70歲以上高齡老人中有1%出現(xiàn)假陽性。螺旋體抗原血清假陽性發(fā)生率比非螺旋體抗原血清試驗(yàn)少，少數(shù)患者出現(xiàn)FTA—ABS假陽性，其熒光染色常很弱或呈不典型的“串珠狀”。
③技術(shù)性假陽性
可能的原因?yàn)榭乖舾行赃^高，血清標(biāo)本弄錯(cuò)或溶血或細(xì)菌污染，工作人員的技術(shù)不熟練等。技術(shù)性誤差引起的假陽性，應(yīng)排除可能存在的干擾因素，重新檢測。
(5)梅毒血清反應(yīng)假陰性可能的原因是
①一期梅毒硬下疳，一般硬下疳出現(xiàn)2～3周，機(jī)體才出現(xiàn)反應(yīng)素，故早期血清反應(yīng)常呈陰性。
②感染梅毒后立即治療或晚期梅毒，由于血清反應(yīng)素低，出現(xiàn)陰性。
③二期梅毒假陰性：這是血清中抗心磷脂抗體過多，抑制陽性反應(yīng)的結(jié)果。即前帶現(xiàn)象(prozonephenomenon)。
④技術(shù)操作或抗原敏感性低出現(xiàn)血清試驗(yàn)陰性。
微生物學(xué)檢測
1.梅毒病原體的檢測梅毒螺旋體一般染料不易著色，常采用鍍銀染色、熒光染色后檢測。用暗視野顯微鏡也可從病變標(biāo)本中直接觀察到梅毒螺旋體。
(1)暗視野顯微鏡檢查梅毒螺旋體(DF)
暗視野顯微鏡檢查采用一個(gè)特殊的聚光器，其中央為黑色遮光板所遮蔽，光線不能直接通向鏡筒，僅可從其四周邊緣斜射到載玻片上。如該斜射光線遇到載玻片上的細(xì)菌、螺旋體等，由于菌體和周圍液體折光率不同，物體在暗視野內(nèi)由于折射顯現(xiàn)發(fā)光。暗視野顯微鏡檢查是梅毒病原體檢測的主要方法之一，可直接觀察到病灶分泌物中的梅毒螺旋體，結(jié)合臨床癥狀可直接診斷梅毒。
1)標(biāo)本采集和處理
①皮膚黏膜損害：先在載玻片上放1～2滴9g/L氯化鈉溶液。另用棉拭子蘸取無菌9g/L氯化鈉溶液輕輕擦盡皮損上的污物(如皮損上有痂皮，可用鈍刀輕輕除去)，用手?jǐn)D壓皮損周圍，使組織漿液滲出，用鈍刀輕輕刮取數(shù)次(避免出血)，取滲液混入載玻片上9g/L氯化鈉溶液中，加蓋玻片后置暗視野顯微鏡下檢查。
②淋巴結(jié)：消毒淋巴結(jié)表面的皮膚，用1ml無菌注射器吸取無菌9g/L氯化鈉溶液0.25～0.50ml，無菌操作穿刺淋巴結(jié)并注人9g/L氯化鈉溶液，再吸人注射器內(nèi)。如此反復(fù)2～3次后，取少量的淋巴液直接滴于載玻片上，加蓋玻片，置暗視野顯微鏡檢查。
③羊水：梅毒孕婦的羊膜穿刺術(shù)應(yīng)由專業(yè)人員操作，獲得羊水直接滴于載玻片上，加蓋玻片，置暗視野顯微鏡檢查。
2)檢測方法
將顯微鏡聚光器換上暗視野聚光器，將標(biāo)本置載物臺上，先用10倍物鏡，再用40倍物鏡觀察。調(diào)整聚光器的高度要適中，使物像清晰為度。暗視野顯微鏡下，螺旋體呈纖細(xì)螺旋狀，長約5～20μm，有6～12個(gè)螺旋。見到運(yùn)動活潑的螺旋體即為陽性。
3)診斷意義及評價(jià)
①該方法不僅操作簡單，且經(jīng)濟(jì)、快速，陽性結(jié)果可以確診梅毒，陰性結(jié)果不能完全除外梅毒。
②對有皮膚黏膜損害和淋巴結(jié)病變的一期、二期梅毒的診斷具有重要價(jià)值，適用于早期梅毒的診斷。
③羊水檢查對先天性梅毒診斷有重要價(jià)值。
④用藥、取材不當(dāng)?shù)容^多因素可影響檢查結(jié)果。
⑤此法不適用于晚期及隱性梅毒或口腔、肛周等部位標(biāo)本的檢測。
(2)免疫熒光染色法
含梅毒螺旋體抗體血清，加非致病性螺旋體培養(yǎng)物進(jìn)行吸收，再與異硫氰酸熒光素(HTC)相結(jié)合，梅毒螺旋體在熒光顯微鏡下呈綠色熒光，易于觀察。
1)檢測方法
分直接免疫熒光法和間接免疫熒光法。
2)診斷意義及評價(jià)
①免疫熒光法的診斷價(jià)值與暗視野顯微鏡檢查法相似。靈敏性稍高于暗視野檢查。
②免疫熒光抗體法檢查既可以檢測皮損分泌物，又可以檢測新鮮或甲醛固定組織中的梅毒螺旋體。
③免疫熒光抗體法陽性結(jié)果可確診為梅毒，陰性結(jié)果不能完全除外梅毒，因?yàn)闃?biāo)本、FITC、抗血清質(zhì)量以及操作技術(shù)等方面的影響均可能導(dǎo)致假陰性結(jié)果。
④可用于口腔、肛周等部位標(biāo)本中梅毒螺旋體的檢測。
(3)螺旋體鍍銀染色法
螺旋體具有親銀性。硝酸銀可使之染成棕黑色。
1)檢測方法
取材、涂片后在空氣中自然干燥，羅吉固定液固定1～2分鐘，無水乙醇洗滌，滴媒染液2～3滴，用乙醇燈微加熱至產(chǎn)生熱蒸汽為止，染30秒后水洗，最后滴加銀染液并加熱產(chǎn)生蒸汽，染30秒后水洗，自然干燥后置油鏡下鏡檢。背景為淡棕色，螺旋體被染成棕黑色。
2)診斷意義及評價(jià)
①陽性結(jié)果結(jié)合典型的皮膚黏膜損害可確診梅毒，但陰性結(jié)果不能完全除外梅毒。
②有時(shí)某些腐生螺旋體亦呈假陽性反應(yīng)。
③該法適用于缺乏暗視野顯微鏡的基層單位直接檢查梅毒螺旋體。
(4)多功能顯微診斷儀(multifunctionmicroscopydiagnosticinstrument，MDI)
是近年發(fā)展的一種綜合相差對比、暗視野及偏振光的可變投影顯微鏡，待檢標(biāo)本不需染色及任何加工處理，而是將“活的”真實(shí)的樣品直接進(jìn)行觀察，具有直接、方便、快速的優(yōu)點(diǎn)。但整套儀器價(jià)格昂貴.很難普及到各個(gè)梅毒檢測實(shí)驗(yàn)室。
2.基因診斷技術(shù)檢測梅毒螺旋體不能進(jìn)行體外培養(yǎng)，血清學(xué)診斷對確定感染及治療很有意義。但對早期梅毒診斷不敏感，對先天性及神經(jīng)性梅毒的診斷不夠特異。隨著基因診斷技術(shù)的發(fā)展，PCR技術(shù)應(yīng)用于檢測梅毒螺旋體DNA，特異性強(qiáng)，敏感性高，是目前診斷梅毒螺旋體的先進(jìn)方法。
(1)標(biāo)本采集和處理
可采集局部分泌物、淋巴結(jié)液、羊求、血清、腦脊液等標(biāo)本，用煮沸或低速離心或堿裂解等方法從標(biāo)本中提取DNA模板。
(2)檢測方法
PCR檢測梅毒螺旋體時(shí)，一般使用梅毒螺旋體47kD膜抗原基因(tpp47基因)，39kD堿性膜蛋白基因(bmp基因)，TpF1蛋白基因(tpf-1)或TyF1蛋白基因(tyf-1)和tmpA基因，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物通過瓊脂糖凝膠電泳和溴化乙錠染色進(jìn)行鑒定。
(3)診斷意義及評價(jià)
1)敏感性和特異性較高，尤其對無臨床表現(xiàn)、血清學(xué)為陰性的可疑梅毒、神經(jīng)性梅毒、胎傳梅毒等具有較好的輔助診斷價(jià)值。
2)不能區(qū)分恬的和死的螺旋體，一般不用于梅毒治療后的復(fù)查。但死亡的梅毒螺旋體經(jīng)15～30天即從機(jī)體內(nèi)清除，故治療數(shù)周后PCR陽性意昧著持續(xù)感染的可能。
3.腦脊液檢查晚期梅毒患者，當(dāng)出現(xiàn)神經(jīng)癥狀時(shí).要進(jìn)行腦脊液檢查.以診斷或排除神經(jīng)梅毒。
(1)細(xì)胞計(jì)數(shù)
腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)也常常是判斷療效的敏感指標(biāo)。當(dāng)有活動的神經(jīng)梅毒存在時(shí)，腦脊液白細(xì)胞計(jì)數(shù)常增高，WBC>5/μl。
(2)蛋白測定
神經(jīng)梅毒時(shí)，腦脊液總蛋白量增加此為非特異性變化。
(3)VDRL試驗(yàn)
為診斷神經(jīng)梅毒的可靠診斷依據(jù)。
(4)腦脊液PCR檢測
可快速準(zhǔn)確診斷神經(jīng)性梅毒。
4.梅毒螺旋體培養(yǎng)梅毒螺旋體人工培養(yǎng)較困難，且易失去毒力。利用家兔對梅毒螺旋體的易感性，把梅毒螺旋體注射于白兔睪丸內(nèi)，觀察有無感染跡象，是經(jīng)典的梅毒診斷方法。但由于費(fèi)用高、檢查時(shí)間長等原因不能應(yīng)用于臨床，目前僅用于科研或保存梅毒螺旋體。
檢驗(yàn)診斷綜合評價(jià)
梅毒的診斷主要取決于血清學(xué)試驗(yàn)。及早、準(zhǔn)確地診斷梅毒需要梅毒實(shí)驗(yàn)室的檢測，選擇敏感性和特異性均高的檢測方法非常重要。目前，梅毒的血清學(xué)診斷包括初篩試驗(yàn)和確認(rèn)斌驗(yàn)。初篩試驗(yàn)主要是性病研究實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用性病實(shí)驗(yàn)研究試驗(yàn)(VDRL)、快速血漿反應(yīng)素(RPR、VDRLRPR和TRUST)試驗(yàn)。此類試驗(yàn)操作簡單，敏感性高，但可出現(xiàn)假陽性，一般作為篩選試驗(yàn)，進(jìn)行梅毒的常規(guī)篩查及療效觀察、判斷復(fù)發(fā)及再感染。但存在假陽性和假陰性。假陽性主要是自身免疫性疾病、傳染性疾病和妊娠等等因素所致，假陰性主要是早期，晚期梅毒以及前帶現(xiàn)象。因此，在梅毒篩查試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)同時(shí)進(jìn)行原樣和1：2滴度稀釋檢查。確診試驗(yàn)包括血清熒光密螺旋體抗體吸收試驗(yàn)(FTA-ABS)、血凝試驗(yàn)(TPHA)、明膠顆粒凝集試驗(yàn)(TPPA)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、免疫印跡試驗(yàn)和梅毒螺旋體制動試驗(yàn)(TPI)等用于特異性IgM、IgG檢查。初步臨床研究表明，特異性IgM可用于診斷新生兒(先天性)梅毒診斷。其他試驗(yàn)一般作為血清學(xué)試驗(yàn)的完善和補(bǔ)充。近年來，也可用PCR技術(shù)檢測蒼白亞種螺旋體的特異DNA片斷，或用免疫印跡法測定與蒼白亞種螺旋體特異抗原組分發(fā)生反應(yīng)的特異性抗體。