迄今為止，感染尖銳濕疣的HPV病毒難于用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)及血清學(xué)技術(shù)檢測(cè)，主要實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)是核酸雜交。近年來(lái)發(fā)展的PCR方法具有特異、敏感、簡(jiǎn)便、快速等優(yōu)點(diǎn)，為HPV檢測(cè)開(kāi)辟了新途徑。

　　(一)標(biāo)本的采集及處理

　　標(biāo)本的采集和預(yù)處理：用刮板或生理鹽水浸潤(rùn)的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細(xì)胞。標(biāo)本核酸的提取，按1體積細(xì)胞懸液加10倍體積的細(xì)胞裂解液37℃下處理過(guò)夜;

　　(二)PCR擴(kuò)增

　　1、 引物設(shè)計(jì)和合成：HPV基因組可分為早期區(qū)(E)和晚期區(qū)(L)，每區(qū)含一系列開(kāi)放讀碼框架(ORF)。

　　2、PCR反應(yīng)試劑：Taq DNA聚合酶(2U/ml)、10mmol/L dNTP貯備液，10×PCR緩沖液，100μmol/L MY11和MY09貯備液，滅菌的玻璃蒸餾器制備的蒸餾水。

　　3、PCR擴(kuò)增方法和程序：以100μl PCR反應(yīng)液,用無(wú)菌0.5ml硅化塑料離心管為反應(yīng)管進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)。

　　(三)擴(kuò)增產(chǎn)物的檢測(cè)和分析

　　1、凝膠電泳：擴(kuò)增反應(yīng)結(jié)束后，取出反應(yīng)管，冷卻至室溫，取10μl擴(kuò)增產(chǎn)物用5%-7%聚丙烯酰胺凝膠或1.5%瓊脂糖電泳，溴化乙錠染色，紫外分析儀下分析結(jié)果，分子量約為450bp處出現(xiàn)明顯的DNA帶。

　　2、核酸雜交：如果凝膠電泳無(wú)清楚的DNA或需確定DNA帶的特異性時(shí)，可用標(biāo)記的公用混合探針和(或)型特異探針作Southern吸印雜交、斑點(diǎn)雜交驗(yàn)證。

　　用PCR方法檢測(cè)HPV比核酸雜交方法優(yōu)越。其敏感性高，GP-PCR方法以凝膠電泳直接分析結(jié)果，可檢出標(biāo)本中200個(gè)拷貝的HPV DNA，若以核酸雜交檢測(cè)PCR產(chǎn)物，敏感性提高，能檢出10個(gè)拷貝的HPV DNA。

　　鑒于PCR技術(shù)的高度敏感性，以生殖道脫落細(xì)胞為檢材足以滿足試驗(yàn)要求，避免了活檢取材、研磨組織繁雜操作。一般情況下，PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳，觀察產(chǎn)生的DNA可直接作出診斷。因此，PCR技術(shù)檢測(cè)HPV實(shí)驗(yàn)周期短、簡(jiǎn)便快速。